Molekulárna diagnostika, o čo ide, o čo slúži a ako sa to robí

Molekulárna diagnostika zodpovedá súboru molekulárnych techník, ktorých cieľom je identifikovať zmeny v DNA, ktoré by mohli napríklad naznačovať genetické choroby alebo rakovinu. Molekulové techniky sa okrem toho široko používajú na identifikáciu a potvrdenie infekčných chorôb, pretože predstavujú rýchlejšiu a presnejšiu diagnostickú metódu..

Molekulárna diagnostika je nákladná, a preto ju lekári často nevyžadujú, poskytuje však presné výsledky, pokiaľ ide o prítomnosť zmeny, spôsob, akým môže narušiť fungovanie organizmu a reakciu pacienta na liečba.

Na čo to je

Molekulárna diagnostika sa môže vykonávať s niekoľkými cieľmi, pričom hlavnými cieľmi sú:

• Identifikácia mutácií súvisiacich s leukémie, ako je identifikácia translokácie BCR-ABL, ktorá je charakteristická pre chronickú myeloidnú leukémiu (CML);
• Charakteristické mutácie hematologické ochorenia, ako je dedičná hemochromatóza, polycytémia vera, esenciálna trombocytémia a trombofília, napríklad.
• Molekulové zmeny, ktoré naznačujú výskyt rakovina, ako je napríklad kolorektálna rakovina, rakovina pľúc, prsníka a mozgu;
• Diagnóza infekčné choroby, ako je hepatitída, uretritída, toxoplazmóza, leishmanióza atď HPV vírus.

Molekulárna diagnostika je presnejšia napriek tomu, že sa v porovnaní s inými diagnostickými technikami považuje za nákladnú, pretože je schopná informovať, ktorá zmena súvisí s určitým ochorením a stupeň vplyvu tejto zmeny v organizme, čím pomáha liečiť osobu..

Okrem toho, že sa používajú na diagnostiku niekoľkých chorôb, používajú sa aj molekulárne techniky na hodnotenie reakcie na liečbu, najmä u ľudí s rakovinou, čo je jedna z najúčinnejších metód na označenie progresie a relapsu ochorenia..

Ako sa to robí

Molekulárna diagnostika sa môže vykonať s akoukoľvek vzorkou na žiadosť lekára, ktorá môže čo najlepšie poskytnúť informácie o stave pacienta, ktorým môže byť moč, sliny alebo vo väčšine prípadov krv. Pôst alebo akákoľvek iná príprava na skúšku nie je potrebná.

Vzorka sa odoberie a zašle do laboratória spolu s usmernením lekára informujúcim o skúške alebo type výskumu, ktorý by sa mal vykonať. Vykonaná molekulárna technika závisí od požadovanej skúšky a zahŕňa rad presných postupov, ktorých cieľom je zistiť prítomnosť alebo neprítomnosť zmeny požadovanej lekárom..

Zvyčajne sa používa iba malé množstvo odoslanej vzorky, zvyšok sa uloží tak, aby sa v prípade potreby skúška zopakovala.

Pozrite sa, aké sú hlavné molekulárne techniky

PCR

PCR, skratka pre polymerázovú reťazovú reakciu alebo Polymerázová reťazová reakcia, je molekulárna technika, ktorá spočíva v amplifikácii fragmentu genetického materiálu, či už DNA alebo RNA, s cieľom identifikovať mutácie, a teda pomôcť pri diagnostike chorôb..

Táto technika sa vyrába z extrakcie a čistenia genetického materiálu, ktorý sa potom umiestni do zmesi, v ktorej je jednou zo zložiek reštrikčný enzým, ktorý sa mení podľa požadovaného vyšetrenia a ktorého funkciou je rozrezať materiál na fragmenty. tak, aby bolo možné identifikovať možnú genetickú zmenu. Zmes sa umiestni do termocyklera, čo je zariadenie, ktoré pôsobí prostredníctvom kolísania teploty indikovaného odborníkom podľa skúšky a umožňuje tak amplifikáciu genetického fragmentu. V prípade konvenčnej PCR sa produkt PCR po amplifikácii podrobí elektroforéza, čo je molekulárna technika založená na hmotnosti a veľkosti fragmentov, to znamená, že podľa týchto charakteristík sa generuje prúžkový vzor, ​​ktorého analýza sa vykonáva na základe pozitívneho kontrolného prúžku, tj známeho prúžku ktoré zodpovedajú genetickej zmene.

PCR v reálnom čase, nazýva sa tiež qPCR, je to typ kvantitatívnej PCR, to znamená, že okrem identifikácie genetickej alterácie je schopný poskytnúť informácie o génovej expresii, to znamená, do akej miery sa zmenený gén v organizme exprimuje, a teda môže byť používa sa na pomoc pri diagnostike a monitorovaní liečby. PCR v reálnom čase nevyžaduje elektroforézu, celý proces amplifikácie a analýzy genetického materiálu sa vykonáva pomocou zariadenia a výsledok interpretuje vyškolený zdravotnícky pracovník..

sekvenovania

sekvenovania je molekulárna technika, ktorá spočíva v určení sekvencie DNA nukleotidov, ktoré sú tvoriacimi jednotkami genetického materiálu. K sekvencovaniu dochádza pri reakcii podobnej PCR, avšak v amplifikačnej zmesi sa modifikované nukleotidy pridávajú pridaním fluórchrómov, ktoré, ako je materiál amplifikovaný, sú modifikované nukleotidy začlenené do DNA a vytvárajú niekoľko fragmentov, ktoré zodpovedajú produktu na sekvenovanie.

Reakčný produkt sa umiestni do zariadenia nazývaného sekvencer DNA, v ktorom, ako sa fragmenty dostanú laserom zariadenia, sa excitujú fluórchrómy a emitujú fluorescenciu, ktorá je indikovaná zariadením pomocou píkov, pričom každý vrchol zodpovedá na nukleotid. Na konci reakcie bude zariadenie informovať sekvenciu DNA, a tak bude môcť lekárovi pomôcť pri diagnostike genetických chorôb..