Elektroforéza, o čo ide, na čo slúži a ako sa to robí
Elektroforéza je laboratórna technika vykonávaná s cieľom separácie molekúl podľa ich veľkosti a elektrického náboja, aby bolo možné stanoviť diagnózu chorôb, overiť expresiu proteínov alebo identifikovať mikroorganizmy..
Elektroforéza je jednoduchý a lacný postup, ktorý sa používa v laboratórnej rutine a vo výskumných projektoch. Podľa účelu elektroforézy môže byť na vykonanie diagnózy potrebné vykonať ďalšie testy a vyšetrenia, napríklad.
Na čo to je
Elektroforéza sa môže vykonávať na rôzne účely, a to ako vo výskumných projektoch, tak pri diagnostike, pretože ide o jednoduchú a lacnú techniku. Elektroforéza sa teda môže uskutočňovať na:
- Identifikovať vírusy, huby, baktérie a parazity, pričom táto aplikácia je bežnejšia vo výskumných projektoch;
- Test otcovstva;
- Skontrolujte expresiu proteínov;
- Identifikujte mutácie, ktoré sú užitočné napríklad pri diagnostike leukémie;
- Analyzujte typy cirkulujúceho hemoglobínu, ktoré sú užitočné pri diagnostike kosáčikovitej anémie;
- Stanovte množstvo bielkovín prítomných v krvi.
Podľa účelu elektroforézy môže byť na vykonanie diagnózy potrebné vykonať lekárovi ďalšie doplnkové testy.
Ako sa to robí
Na uskutočnenie elektroforézy je okrem gélového svetla UV alebo LED, známeho tiež ako transiluminátor, potrebný gél, ktorý môže byť z polyakrylamidu alebo agarózy v závislosti od objektívu, elektroforetického tlmivého roztoku a kade, markera molekulovej hmotnosti a fluorescenčného farbiva..
Po príprave gélu sa musí umiestniť špecifický predmet tak, aby sa jamky pripravili v géli, bežne nazývanom hrebeň, a nechal gél stuhnúť. Keď je gél pripravený, naneste látky do jamiek. Na tento účel sa musí marker molekulárnej hmotnosti umiestniť do jednej z jamiek, pozitívna kontrola, čo je látka, ktorá je známa, čo je to, negatívna kontrola, ktorá zaručuje platnosť reakcie, a vzorky, ktoré sa majú analyzovať. Všetky vzorky sa musia zmiešať s fluorescenčným farbivom, pretože je možné vizualizovať pruhy na transiluminátore..
Gél so vzorkami sa musí umiestniť do elektroforetickej vane, ktorá obsahuje špecifický tlmivý roztok, a potom sa zariadenie zapne tak, aby existoval elektrický prúd a následne aj potenciálny rozdiel, ktorý je dôležitý pre separáciu. častice podľa ich zaťaženia a veľkosti. Elektroforetická doba prevádzky sa líši v závislosti od cieľa postupu a môže trvať až 1 hodinu.
Po stanovenom čase je možné zobraziť výsledok elektroforetického prechodu cez transiluminátor. Keď je gél umiestnený pod UV alebo LED svetlom, je možné vizualizovať prúžkovaný vzor: čím väčšia je molekula, tým menšia je migrácia, čím sa dostane bližšie k jamke, zatiaľ čo čím je molekula ľahšia, tým je väčší migračný potenciál..
Aby bola reakcia validovaná, je potrebné, aby boli pruhy pozitívnej kontroly vizualizované a aby v negatívnej kontrole nebolo vizualizované nič, pretože inak to znamená, že došlo ku kontaminácii a celý proces sa musí opakovať..
Druhy elektroforézy
Elektroforéza sa môže vykonávať na rôzne účely a podľa svojho účelu sa môže použiť niekoľko typov gélov, z ktorých najbežnejším je polyakrylamid a agaróza..
Elektroforéza na identifikáciu mikroorganizmov sa častejšie vykonáva vo výskumných laboratóriách, avšak na diagnostické účely sa elektroforéza môže použiť na identifikáciu hematologických chorôb a chorôb, ktoré sa vyvíjajú so zvýšením množstva proteínov, ktoré sú hlavnými typmi elektroforézy. :
1. Hemoglobínová elektroforéza
Elektroforéza hemoglobínu je laboratórna technika vykonávaná na identifikáciu rôznych typov hemoglobínu cirkulujúceho v krvi, čo umožňuje identifikovať prítomnosť chorôb súvisiacich so syntézou hemoglobínu. Typ hemoglobínu sa identifikuje elektroforézou pri špecifickom pH, ideálne medzi 8,0 a 9,0, pričom sa overuje vzorec pruhov, ktorý sa dá porovnať s normálnym obrazcom, čo umožňuje identifikáciu prítomnosti abnormálnych hemoglobínov..
Na čo je určený: Elektroforéza hemoglobínu sa vykonáva na skúmanie a diagnostikovanie chorôb súvisiacich s syntézou hemoglobínu, ako je kosáčikovitá anémia a hemoglobínová choroba C, okrem toho, že je užitočná pri diferenciácii talasémie. Naučte sa interpretovať elektroforézu hemoglobínu.
2. Proteínová elektroforéza
Elektroforéza proteínov je skúška, ktorú požaduje lekár na vyhodnotenie množstva proteínov cirkulujúcich v krvi, a teda na identifikáciu chorôb. Tento test sa vykonáva zo vzorky krvi, ktorá sa odstredí, aby sa získala plazma, pričom časť krvi pozostáva okrem iných látok z proteínov..
Po elektroforéze je možné vizualizovať prúžky a následne graf, v ktorom je uvedené množstvo každej frakcie proteínov, čo je pre diagnostiku zásadné.
Na čo je určený: Proteínová elektroforéza umožňuje lekárovi vyšetriť výskyt mnohopočetného myelómu, dehydratácie, cirhózy, zápalu, ochorenia pečene, pankreatitídy, lupusu a hypertenzie podľa vzoru pruhov a grafu uvedeného v správe o vyšetrení..
Pochopte, ako sa to robí a ako chápať výsledok proteínovej elektroforézy.
